| 产品描述 | BCA Protein Assay Kit是一种即用型的Western blot相关总蛋白分析试剂, 可通过测量562 nm处的吸光度并与蛋白标准物的吸光度-浓度曲线进行比较, 快速测定总蛋白浓度. 蛋白质定量过程可以在45分钟内完成.
基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成, 实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定. 其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物, 同时将Cu2+还原成Cu+. 该测定法的紫色反应产物是由两个BCA分子与一个亚铜离子螯合形成的. 这种水溶性复合物在562 nm处表现出很强的吸光度, 在较宽的工作范围 (20-2,000μg/ ml) 中, 随着蛋白质浓度的增加, 吸光度几乎呈线性.
BCA方法不是真正的端点方法; 也就是说, 最终颜色会继续变化. 但是, 孵育后, 颜色变化的速度足够慢可以允许分析大量的样品. 据报道, 蛋白质的大分子结构, 肽键的数量以及四种特定氨基酸 (半胱氨酸，胱氨酸，色氨酸和酪氨酸) 的存在与BCA的颜色形成有关. 对二肽, 三肽和四肽的研究表明, 颜色形成的程度不仅仅是由单个产生颜色的官能团的总和引起的.
因此, 通常参考诸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常见蛋白质的标准来确定待测蛋白质浓度. 从蛋白质制备一系列已知浓度的稀释液, 并与待测物一起进行测定, 然后根据标准曲线确定每个待测物的浓度. 如果需要精确定量待测蛋白质, 建议选择质量与待测蛋白质相似的蛋白质标准品. 例如, 在测定免疫球蛋白样品时, 可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 标准品. 在介绍了两种检测法中, 其中, 试管检测法需要更大体积 (0.1毫升) 的蛋白质样品; 但是, 由于它使用的样品与工作试剂之比为1:20 (v / v), 因此干扰物质的影响降至最低. |
