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一种新方法,点击化学-CuAAC（铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应），以及该反应在直接测量细胞周期中S期DNA合成中的应用。 “点击化学”是K. B. Sharpless于2001年引入的一个术语，它是在生物连接中常用的一组具有生物相容性的小分子反应，允许将底物与特定生物分子（例如报道分子）结合在一起。
胸腺嘧啶核苷类似物，EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团，可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应，从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和6-FAM Azide具有生物学上独特的基团，连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA，获得低背景的图像和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的，并且可以通过流式细胞术，荧光计或荧光显微镜以定量方式使用。
EdU是BrdU的理想替代品，因为它不受苛刻的DNA变性条件（通常使用HCl，加热或DNase消化）的影响。在基于BrdU的检测中，需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体，此抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比体积巨大。与巨大的抗体不同，炔基和叠氮基的体积非常小，因此6-FAM叠氮化物在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外基于BrdU的测定后的样品，由于使用酸变性方法时，有可能破坏了抗原识别位点，导致细胞周期分布的信号改变。而基于EdU的测定与细胞周期染料兼容。 EdU分析还可以与一些针对表面和细胞内标记的抗体一起并用。但是，某些试剂或抗体偶联物可能与EdU检测反应不兼容，并且可能需要一些其他步骤来确保兼容性。
6-FAM Azide（0最大激发波长为496 nm，最大发射波长为516 nm）。
操作简单，花费时间更少，无需变性步骤或苛刻的处理
效率高，亮度高
与某些抗体和细胞周期染料兼容
由于不使用可变的抗BrdU抗体，因此具有很高的一致性
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