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在体外从培养基中提取分泌的蛋白质时,蛋白质产生停止,降解增加。细胞粗提取物中含有许多能够降解提取物中蛋白质的内源性酶,如磷酸酶和蛋白酶。提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。
Protease Inhibitor Cocktail用于组织培养基以提高蛋白质的稳定性。该cocktail起到抑制降解非磷酸化或磷酸化蛋白质底物的蛋白酶的作用。这个cocktail用作组织培养基的补充物,以阻止分泌蛋白的降解。
该Protease Inhibitor Cocktail包含单独的组分,包括Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin和Pepstatin A,这些物质对半胱氨酸、丝氨酸、天冬氨酸和氨基肽酶具有广谱特异的抑制性。已经用组织培养基对这种蛋白酶抑制剂cocktail进行了优化和测试。该蛋白酶抑制剂cocktail溶剂为DMSO,作为即用型溶液提供。
Catalog No. | Product Name | Summary | Targets | CAS Number | Smiles |
A2574 | Aprotinin | 牛胰蛋白酶抑制剂 | Proteases|Serine Protease | 9087-70-1 | CC(O)=O.CC.CC.CCccC.[R].[P].[2H].[L].[E].[P].[P].[Y].[3H].[G].[KH].[R].[R].[Y].F.[Y].[*].[L].F.[V].[Y].[G].[G].[R].[KH].[R].N.N.F.[KH].S.[*].[2H].[R].[G].[G].[*].[KH].[*].[3H].C.[*].F.[P].[*].I.I.N.[Q].[3H].[M] |
A2575 | Bestatin | 氨肽酶抑制剂 | Proteases|Aminopeptidase | 58970-76-6 | CC(C)CC(C(=O)O)NC(=O)C(C(CC1=CC=CC=C1)N)O |
A2576 | E-64 | 半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease)抑制剂 | Proteases|Cathepsin | 66701-25-5 | CC(C)CC(C(=O)NCCCCN=C(N)N)NC(=O)C1C(O1)C(=O)O |
A2570 | Leupeptin, Microbial | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | Proteases|Serine Protease | 103476-89-7 | O=C(C(C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H])([H])N([H])C(C([H])([H])[H])=O)N([H])C(C(N([H])C(C([H])=O)([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/N=C(N([H])[H])/N([H])[H])=O)([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] |
A2571 | Pepstatin A | 天冬氨酸蛋白酶抑制剂 | Proteases|Other Proteases | 26305-03-3 | 3-hydroxy-4-[2-[[3-hydroxy-6-methyl-4-[[3-methyl-2-[[3-methyl-2-(3-methylbutanoylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]amino]propanoylamino]-6-methylheptanoic acid |
-20°C条件下储存,稳定12个月以上。 |
1)Q:实验中经常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势?
A:PMSF只能抑制一种蛋白酶(丝氨酸蛋白酶),Cocktail抑制的更全面且更加持久;此外,PMSF毒性较高并且PMSF更容易降解失效。
2)Q:抑制剂Cocktail可以反复冻融吗?
A:可以反复冻融,但是尽量减少反复冻融的次数。
3)Q:应该选择片剂的Cocktail还是溶液型Cocktail?
A:两种类型的产品都含有添加物,片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分,而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。溶液型需要的加工步骤少,因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势。(片剂能够在4°C储存而不需要-20°C)。
4)Q:用了Cocktail,蛋白仍然降解是怎么回事?
A:蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解,提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白,Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况,可检查实验操作步骤和设计,减少导致蛋白降解的环节。例如,细胞处理前,先要将Cocktail加入到裂解液中并混匀,收集完细胞后立即加入准备好的裂解液。
建议适当地稀释cocktail以用于不同的细胞系。稀释测试至少以200倍的稀释倍数开始,因为DMSO浓度高于0.5%可能对细胞有害。由于不同的细胞系敏感性可能有差异,该cocktail可能需要进一步的稀释。这个cocktail的作用在培养基中可维持48小时,48小时后需要更换含有cocktail的新鲜培养基。
应用:WB,Co-IP,pull-down,IF,IHC,kinase assay等。
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