PF-477736

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PF-477736

本产品不向个人销售，仅用作科学研究，不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。

CAS NO:

952021-60-2

包装与价格：

包装	价格(元)
10mM (in 1mL DMSO)	询价
5mg	询价
10mg	询价
50mg	询价

化学性质

Storage	Store at -20°C
M.Wt	419.48
Cas No.	952021-60-2
Formula	C22H25N7O2
Solubility	insoluble in EtOH; insoluble in H2O; ≥5.24 mg/mL in DMSO
Chemical Name	(R)-2-amino-2-cyclohexyl-N-(2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-6-oxo-5,6-dihydro-4H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-yl)acetamide
Canonical SMILES	O=C(C(C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])([H])N([H])[H])N([H])C2=C([H])C3=C4C(N=C(C5=C([H])N(C([H])([H])[H])N=C5[H])C4=C([H])N([H])N([H])C3=O)=C2[H]
运输条件	蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议	为了使其更好的溶解，请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存，请尽快用完。

资料参考

PF-477736是一种有效的、选择性的和ATP竞争性的Chk1小分子抑制剂，在体外激酶实验中，Chk1的Ki值为0.49±0.29 nM[1]。

PF-477736显示出对Chk1的选择性抑制，作用于Chk1、CDK1和Chk2，IC50值分别为0.49 nM、9.9 μM和47 nM。在斑点印迹实验中，PF-477736抑制camptothecin（喜树碱）诱导的G2期停滞，在P53突变人淋巴瘤CA46细胞、HeLa细胞和HT29细胞中的EC50值分别为45 nM、38 nM和42 nM。PF-477736选择性地靶向p53缺陷的癌细胞，而对正常细胞（p53完整）有最小的细胞毒性效应[1]。

在Colo205异种移植物中，PF-00477736剂量依赖性地增强最大耐受剂量（MTD）的gemcitabine（吉西他滨）的抗肿瘤活性，通过监测体重的变化，发现没有明显的全身毒性恶化[1]。

参考文献：
[1] Blasina A1, Hallin J, Chen E, Arango ME, Kraynov E, Register J, Grant S, Ninkovic S, Chen P, Nichols T, O'Connor P, Anderes K. Breaching the DNA damage checkpoint via PF-00477736, a novel small-molecule inhibitor of checkpoint kinase 1. Mol Cancer Ther. 2008 Aug;7(8):2394-404.

试验操作

酶学实验[1]:
激酶检测	通过丙酮酸激酶-乳酸脱氢酶偶联，连续分光光度法测定CHK1活性，其中CHK1肽底物（Syntide-2，PLARTLSVAGLPGKK）的磷酸化与NADH的氧化偶联，并且在340nM处测量相应的吸光度变化。反应在30℃下，在96℃板中进行20分钟，0.1mL反应体系，缓冲液中含50mM TRIS pH 7.5，0.4M NaCl，4mM PEP，0.15mM NADH，28单位乳酸脱氢酶/mL，16单位丙酮酸激酶/mL，3mM DTT，0.125mM Syntide-2，0.15mM ATP和25mM氯化镁。用1nM CHK1激酶结构域起始反应。通过在不同浓度的PF-477736存在下测量初始速度来测定对CHK1活性的抑制。
细胞实验[2]:
细胞系	HT29细胞系
溶解方法	在DMSO中的溶解度> 5.2mg/mL。为了获得更高浓度，可以将离心管在37℃加热10分钟和/或在超声波浴中震荡一段时间。原液可以在-20℃以下储存几个月。
反应条件	69 nM，24小时
应用	吉西他滨和PF-477736联合处理使吉西他滨的细胞毒活性显著增强，表明组合治疗可引起永久细胞损伤，即使在去除药物后也不能恢复。由联合治疗诱导的细胞杀伤是时间和剂量依赖性的。
动物实验[2]:
动物模型	无胸腺裸鼠Colo205异种移植模型
剂量	腹腔注射，4-60 mg/kg，q3d × 4
应用	在小鼠异种移植模型中，PF-477736以剂量依赖的方式增强吉西他滨的抗肿瘤活性。
注意事项	请测试所有化合物在室内的溶解度，实际溶解度和理论值可能略有不同。这是由实验系统的误差引起的，属于正常现象。
References: [1] Blasina A1, Hallin J, Chen E, Arango ME, Kraynov E, Register J, Grant S, Ninkovic S, Chen P, Nichols T, O'Connor P, Anderes K. Breaching the DNA damage checkpoint via PF-00477736, a novel small-molecule inhibitor of checkpoint kinase 1. Mol Cancer Ther. 2008 Aug;7(8):2394-404.

生物活性

Description	PF-477736是一种选择性的、有效的和ATP竞争性的Chk1抑制剂，Ki值为0.49 nM。
靶点	Chk1	VEGFR2	Fms	YES	Chk2
IC50	0.49 nM(Ki)	8 nM(Ki)	10 nM(Ki)	14 nM(Ki)	47 nM(Ki)